TÁCH CHIẾT DNA
Theo ahined (2009) có modify.
1. Ngâm lá trong TE (100mM Tris, 1ml EDTA) qua đêm 40C
2. Cắt là thanh từng mảnh nhỏ, cho vào tube 1,5ml.
3. Bổ sung 500µl Extraction buffer ( 100mM Tris HCl, 100mM EDTA, 250mM NaCl. Ngâm mẫu 15 -20 phút. Đồng nhất mẫu bằng tay (dùng đầu côn).
4. Bổ sung thêm 50µl SDS 20%, vortex trong 30s.
5. Ủ 650C trong 60 phút
6. Để nguội ở nhiệt độ phòng, thêm vào 500µl P:C:I
7. Ly tâm 14 000 rpm, 7’ ở nhiệt độ phòng (250C). Hút lớp nước ở trên cho vào tube mới.
8. Kết tủa DNA bằng 2V ethanol, ủ ở 200c trong 30 phút( càng lâu càng tốt) ly tâm 12.000 rpm trong vòng 12 phút kết quả thu được DNA
Theo ahined (2009) có modify.
1. Ngâm lá trong TE (100mM Tris, 1ml EDTA) qua đêm 40C
2. Cắt là thanh từng mảnh nhỏ, cho vào tube 1,5ml.
3. Bổ sung 500µl Extraction buffer ( 100mM Tris HCl, 100mM EDTA, 250mM NaCl. Ngâm mẫu 15 -20 phút. Đồng nhất mẫu bằng tay (dùng đầu côn).
4. Bổ sung thêm 50µl SDS 20%, vortex trong 30s.
5. Ủ 650C trong 60 phút
6. Để nguội ở nhiệt độ phòng, thêm vào 500µl P:C:I
7. Ly tâm 14 000 rpm, 7’ ở nhiệt độ phòng (250C). Hút lớp nước ở trên cho vào tube mới.
8. Kết tủa DNA bằng 2V ethanol, ủ ở 200c trong 30 phút( càng lâu càng tốt) ly tâm 12.000 rpm trong vòng 12 phút kết quả thu được DNA