Mục lục:
Phầ n 1: M Ở ĐẦU
1.1 Đặt vấ n đề ........................................................................................................1
1.2 Mục đích ..........................................................................................................2
1.3 Yêu cầ u ............................................................................................................2
Phầ n 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆ U
2.1 Đặc điể m chung của cây d ứ a. ..........................................................................3
2.2 Phân loạ i...........................................................................................................4
2.3 Tình hình sả n xu ấ t và tiêu thụ d ứ a trên thế giớ i và ở Việ t Nam......................7
2.4 Bệ nh héo đỏ đầ u lá trên cây d ứ a ......................................................................9
2.5 Một s ố nghiên c ứ u về b ệ nh héo đỏ đầ u lá trên thế giới và ở Việ t Nam. .......13
2.6 Các ph ương pháp chẩ n đoán PMWaV...........................................................15
2.7 Gene HSP 70 của PMWaV-1.........................................................................16
2.8 Phương pháp PCR (Polymerase Chain Reaction)..........................................17
2.8.1 Nguyên tắ c của ph ương pháp PCR .....................................................17
2.8.2 Các yế u tố quan trọ ng trong ph ả n ứ ng PCR .......................................19
2.8.2.1 Dung d ị ch đệ m (Buffer) .............................................................19
2.8.2.2 Mg
2+ ............................................................................................................................. ............
19
2.8.2.3 Deoxyribonucleotide triphosphates (dNTPs).............................19
2.8.2.4 Primer (đoạ n m ồi) ......................................................................20
2.8.2.5 Taq – polymerase .......................................................................20
2.8.2.6 Số chu k ỳ c ủa ph ả n ứ ng PCR.....................................................21
2.9 Phương pháp RT-PCR (Reverse transcription PCR)...................................21
2.10 K ỹ thu ậ t gi ả i trình t ự DNA. (Sequencing)...................................................24
Phầ n 3: V ẬT LI Ệ U VÀ PH ƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨ U
3.1 Vậ t liệ u nghiên cứ u. ......................................................................................25
3.1.1 Mẫ u .......................................................................................................25
3.1.2 D ụng c ụ và thi ế t bị ................................................................................25
3.1.3 Hóa chấ t ................................................................................................26
3.1.3.1 Hoá chấ t dùng cho tách chi ế t RNA .............................................26
3.1.3.2 Hoá chấ t dùng cho ph ả n ứ ng RT-PCR ........................................26
3.1.3.3 Hóa chấ t dùng cho điệ n di DNA .................................................27
3.1.3.4 Hóa chấ t dùng cho điệ n di RNA .................................................28
3.2 Phương pháp nghiên c ứ u...............................................................................28
3.2.1 Tách chi ế t RNA ....................................................................................28
3.2.2 Điệ n di sả n ph ẩ m ly trích RNA.............................................................29
3.2.3 Xây d ự ng quy trình RT-PCR ................................................................30
3.2.3.1 Khả o sát độ đặ c hi ệ u của primer .................................................30
3.2.3.2 Xác đị nh chu kỳ nhi ệ t t ối ư u .......................................................30
3.2.3.3 Xác đị nh n ồng độ primer thích h ợ p.............................................31
3.2.3.4 Xác đị nh s ố chu k ỳ t ối ư u cho phả n ứ ng RT-PCR ......................31
3.2.4 Điệ n di sả n ph ẩ m RT-PCR ...................................................................31
3.2.5 Giả i trình t ự s ả n ph ẩ m RT-PCR............................................................32
3.2.6 Giám đị nh chồi gi ống d ứ a.....................................................................32
Phầ n 4: K Ế T QUẢ VÀ TH ẢO LUẬN
4.1 Kế t qu ả ly trích RNA.....................................................................................33
4.2 Kế t qu ả xây d ự ng quy trình RT-PCR............................................................34
4.2.1 K ế t qu ả khả o sát độ đặ c hi ệ u của primer ..............................................34
4.2.2 K ế t qu ả xác đị nh chu kỳ nhi ệ t t ối ư u ....................................................36
4.2.2 K ế t qu ả xác đị nh n ồng độ primer thích h ợp..........................................38
4.2.3 K ế t qu ả xác đị nh s ố chu k ỳ t ối ư u cho phả n ứ ng RT-PCR. .................39
4.3 Kế t qu ả kiể m tra sả n ph ẩ m RT-PCR bằ ng phương pháp giả i trình t ự ..........42
4.4 Kế t qu ả giám đị nh chồi gi ống d ứ a ................................................................46
Phầ n 5: K Ế T LUẬ N VÀ ĐỀ NGH Ị
5.1 Kế t lu ậ n. ........................................................................................................49
5.2 Đề ngh ị ..........................................................................................................49
TÀI LI Ệ U THAM KHẢO.........................................................................................50
Địa chỉ download tài liêu: [You must be registered and logged in to see this link.]
Phầ n 1: M Ở ĐẦU
1.1 Đặt vấ n đề ........................................................................................................1
1.2 Mục đích ..........................................................................................................2
1.3 Yêu cầ u ............................................................................................................2
Phầ n 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆ U
2.1 Đặc điể m chung của cây d ứ a. ..........................................................................3
2.2 Phân loạ i...........................................................................................................4
2.3 Tình hình sả n xu ấ t và tiêu thụ d ứ a trên thế giớ i và ở Việ t Nam......................7
2.4 Bệ nh héo đỏ đầ u lá trên cây d ứ a ......................................................................9
2.5 Một s ố nghiên c ứ u về b ệ nh héo đỏ đầ u lá trên thế giới và ở Việ t Nam. .......13
2.6 Các ph ương pháp chẩ n đoán PMWaV...........................................................15
2.7 Gene HSP 70 của PMWaV-1.........................................................................16
2.8 Phương pháp PCR (Polymerase Chain Reaction)..........................................17
2.8.1 Nguyên tắ c của ph ương pháp PCR .....................................................17
2.8.2 Các yế u tố quan trọ ng trong ph ả n ứ ng PCR .......................................19
2.8.2.1 Dung d ị ch đệ m (Buffer) .............................................................19
2.8.2.2 Mg
2+ ............................................................................................................................. ............
19
2.8.2.3 Deoxyribonucleotide triphosphates (dNTPs).............................19
2.8.2.4 Primer (đoạ n m ồi) ......................................................................20
2.8.2.5 Taq – polymerase .......................................................................20
2.8.2.6 Số chu k ỳ c ủa ph ả n ứ ng PCR.....................................................21
2.9 Phương pháp RT-PCR (Reverse transcription PCR)...................................21
2.10 K ỹ thu ậ t gi ả i trình t ự DNA. (Sequencing)...................................................24
Phầ n 3: V ẬT LI Ệ U VÀ PH ƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨ U
3.1 Vậ t liệ u nghiên cứ u. ......................................................................................25
3.1.1 Mẫ u .......................................................................................................25
3.1.2 D ụng c ụ và thi ế t bị ................................................................................25
3.1.3 Hóa chấ t ................................................................................................26
3.1.3.1 Hoá chấ t dùng cho tách chi ế t RNA .............................................26
3.1.3.2 Hoá chấ t dùng cho ph ả n ứ ng RT-PCR ........................................26
3.1.3.3 Hóa chấ t dùng cho điệ n di DNA .................................................27
3.1.3.4 Hóa chấ t dùng cho điệ n di RNA .................................................28
3.2 Phương pháp nghiên c ứ u...............................................................................28
3.2.1 Tách chi ế t RNA ....................................................................................28
3.2.2 Điệ n di sả n ph ẩ m ly trích RNA.............................................................29
3.2.3 Xây d ự ng quy trình RT-PCR ................................................................30
3.2.3.1 Khả o sát độ đặ c hi ệ u của primer .................................................30
3.2.3.2 Xác đị nh chu kỳ nhi ệ t t ối ư u .......................................................30
3.2.3.3 Xác đị nh n ồng độ primer thích h ợ p.............................................31
3.2.3.4 Xác đị nh s ố chu k ỳ t ối ư u cho phả n ứ ng RT-PCR ......................31
3.2.4 Điệ n di sả n ph ẩ m RT-PCR ...................................................................31
3.2.5 Giả i trình t ự s ả n ph ẩ m RT-PCR............................................................32
3.2.6 Giám đị nh chồi gi ống d ứ a.....................................................................32
Phầ n 4: K Ế T QUẢ VÀ TH ẢO LUẬN
4.1 Kế t qu ả ly trích RNA.....................................................................................33
4.2 Kế t qu ả xây d ự ng quy trình RT-PCR............................................................34
4.2.1 K ế t qu ả khả o sát độ đặ c hi ệ u của primer ..............................................34
4.2.2 K ế t qu ả xác đị nh chu kỳ nhi ệ t t ối ư u ....................................................36
4.2.2 K ế t qu ả xác đị nh n ồng độ primer thích h ợp..........................................38
4.2.3 K ế t qu ả xác đị nh s ố chu k ỳ t ối ư u cho phả n ứ ng RT-PCR. .................39
4.3 Kế t qu ả kiể m tra sả n ph ẩ m RT-PCR bằ ng phương pháp giả i trình t ự ..........42
4.4 Kế t qu ả giám đị nh chồi gi ống d ứ a ................................................................46
Phầ n 5: K Ế T LUẬ N VÀ ĐỀ NGH Ị
5.1 Kế t lu ậ n. ........................................................................................................49
5.2 Đề ngh ị ..........................................................................................................49
TÀI LI Ệ U THAM KHẢO.........................................................................................50
Địa chỉ download tài liêu: [You must be registered and logged in to see this link.]