NGHIÊN CỨU TẠO CÂY DỨA CAYENNE IN VITRO SẠCH VIRUS GÂY BỆNH HÉO ĐỎ ĐẦU LÁ (PMWaV- Pineapple mealybug wilt associated virus)

Mục lục:
PHẦN 1. MỞ ĐẦU .......................................................................................... 1
1.1.Cơ sở tiến hành và ý nghĩa của nghiên cứu...................................................... 1
1.2. Mục tiêu nghiên cứu ...................................................................................... 2
1.3.Giới hạn của đề tài .............................................................................................. 2
PHẦN 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU ............................................................... 3
2.1.Nguồn gốc của cây dứa ....................................................................................... 3
2.2. Đặc điểm thực vật học và sinh thái cây dứa .................................................... 3
2.2.1. Đặc điểm thực vật học .................................................................................... 3
2.2.2.Sinh thái cây dứa ............................................................................................. 4
2.3.Phân loại .............................................................................................................. 5
2.4.Các nhóm dứa chính và các giống dứa phổ biến ở Việt Nam ....................... 6
2.4.1.Các nhóm dứa chính ....................................................................................... 6
2.4.1.Các nhóm dứa chính ....................................................................................... 6
2.4.1.1. Nhóm Cayenne ............................................................................................. 6
2.4.1.2. Nhóm Queen ................................................................................................. 7
2.4.1.3. Nhóm Spanish .............................................................................................. 7
2.4.2. Các giống dứa phổ biến ở Việt Nam ............................................................. 7
2.4.2.1. Dứa hoa Phú Thọ ......................................................................................... 7
2.4.2.2. Dứa hoa Na Hoa (Hoa Bali) ........................................................................ 8
2.4.2.3. Dứa Kiên Giang và dứa Bến Lức (từ địa phƣơng là “khóm”) ............... 8
2.4.2.4. Nhóm dứa Cayenne .................................................................................... 8
2.5. Tình hình sản xuất và sản lƣợng dứa ............................................................. 9
2.5.1. Tình hình sản xuất và sản lƣợng dứa trên thế giới .................................... 9
2.5.2. Tình hình sản xuất và sản lƣợng dứa ở Việt Nam ...................................... 9
2.5.2.1. Tình hình sản xuất ...................................................................................... 9
2.5.2.2. Sản lƣợng dứa .............................................................................................. 10
2.6. Tình hình sâu bệnh trên cây dứa ..................................................................... 10
2.6.1. Các loại sâu hại dứa ....................................................................................... 10
2.6.2. Bệnh hại dứa và phòng trừ ............................................................................ 11
2.6.2.1. Bệnh thối lõi và thối rễ ............................................................................... 11
2.6.2.2. Bệnh thối mềm ............................................................................................ 11
2.6.2.3. Bệnh “luộc lá” .............................................................................................. 12
2.6.2.4. Tuyến trùng hại dứa .................................................................................... 12
2.7.Bệnh héo do virus ............................................................................................... 13
2.8. Phƣơng pháp tạo cây sạch virus ....................................................................... 14
2.8.1. Sơ lƣợc về hình thái, cấu tạo và sự di chuyển của virus thực vật ............. 14
2.8.2. Cơ sở của các phƣơng pháp tạo cây sạch virus ........................................... 15
2.8.3. Các phƣơng pháp tạo cây sạch virus ............................................................ 15
2.8.3.1. Xử lí nhiệt ..................................................................................................... 16
2.8.3.2. Nuôi cấy đỉnh sinh trƣởng .......................................................................... 16
2.8.3.3 Xử lí nhiệt kết hợp nuôi cấy ĐST ............................................................... 19
2.8.3.4 Tạo chồi bất định kết hợp nuôi cấy đỉnh sinh trƣởng ............................... 20
2.8.3.5. Vi ghép .......................................................................................................... 21
2.9. Các phƣơng pháp chẩn đoán bệnh cây do virus ............................................. 21
2.9.1. Các phƣơng pháp kiểm tra dựa trên quá trình huyết thanh học ............. 21
2.9.1.1. Cơ sở khoa học của kĩ thuật huyết thanh học ........................................... 21
2.9.1.2. Phƣơng pháp ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) ............... 21
2.9.1.3. Phƣơng pháp TBIA (Tissue blot immunoassay) ...................................... 22
2.9.2. Phƣơng pháp hiển vi quang học và vi điện tử ............................................. 22
2.9.2.1. Quan sát bằng kính hiển vi quang học ..................................................... 22
2.9.2.2. Quan sát bằng kính hiển vi điện tử ............................................................ 22
2.9.3. Phƣơng pháp chẩn đoán sinh học phân tử ................................................... 23
2.9.3.1. Cơ sở khoa học của các phƣơng pháp chẩn đoán sinh học phân tử ....... 23
2.9.3.2. Polymerase chain reaction (PCR) và Reverse transcription-polymerase c
reaction (RT-PCR) .................................................................................................. 23
2.9.3.3. Phƣơng pháp sử dụng các đoạn đa dạng về chiều dài hạn chế (Restriction
fragment length polymorphism – RFLP) .................................................. 23
2.9.3.4. Probe đánh dấu (Labelled probes) ............................................................. 24
2.10. Các nghiên cứu về bệnh héo đỏ đầu lá (bệnh wilt) ....................................... 24
2.10.1. Các nghiên cứu ngoài nƣớc ......................................................................... 24
2.10.2. Các nghiên cứu trong nƣớc ......................................................................... 26
PHẦN 3. NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ..................... 28
3.1. Nội dung.............................................................................................................. 28
3.2. Thời gian và địa điểm nghiên cứu .................................................................... 28
3.3. Nội dung 1: Tạo cây dứa Cayenne in vitro sạch virus bằng cách kết hợp xử lí
nhiệt và nuôi cấy đỉnh sinh trƣởng ......................................................................... 28
3.3.1. Vật liệu ............................................................................................................. 28
3.3.1.1 Mẫu nuôi cấy ................................................................................................. 28
3.3.1.2. Thiết bị và dụng cụ ...................................................................................... 28
3.3.1.3. Hóa chất ........................................................................................................ 29
3.3.1.4. Phƣơng pháp tiến hành ............................................................................... 29
3.3.1.5. Phƣơng pháp nghiên cứu ............................................................................ 30
3.4. Nội dung 2: Kiểm tra PMWaV trên chồi dứa in vitro tái sinh từ đỉnh sinh trƣởn
.................................................................................................................................... 32
3.4.1. Vật liệu ............................................................................................................. 32
3.4.2. Phƣơng pháp tiến hành .................................................................................. 32
PHẦN 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ........................................................ 35
4.1.Khảo sát khả năng tái sinh của ĐST nuôi cấy trên môi trƣờng MS .............. 35
4.1.1Thời gian tái sinh ............................................................................................. 35
4.1.2. Tỷ lệ tái sinh .................................................................................................... 36
4.1.3. Hệ số nhân chồi .............................................................................................. 36
4.2.Khảo sát ảnh hƣởng của giống và quá trình xử lí nhiệt lên sự sinh trƣởng của cây
tái sinh từ ĐST .......................................................................................................... 38
4.2.1 Chiều cao chồi ............................................................................................... 38
4.2.2. Số lá .................................................................................................................. 39
4.2.3. Số rễ ................................................................................................................. 40
4.2.4 Chiều dài rễ ...................................................................................................... 41
4.3. Kết quả kiểm tra PMWaV chồi tái sinh từ ĐST ............................................ 43
4.3.1. Kết quả kiểm tra PMWaV-1 ......................................................................... 43
4.3.2. Kết quả kiểm tra PMWaV-2 ........................................................................ 44
PHẦN 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ ............................................................. 47
5.1.Kết luận ............................................................................................................... 47
5.2.Đề nghị ................................................................................................................. 48
TÀI LIỆU THAM KHẢO

Địa chỉ download tài liêu: [You must be registered and logged in to see this link.]