ĐÁNH GIÁ SƠ BỘ MỨC ĐỘ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA QUẦN THỂ ĐIỀU (Acanardium occidentale L.) HIỆN ĐƯỢC TRỒNG TẠI TỈNH NINH THUẬN BẰNG KỸ THUẬT RAPD VÀ AFLP

Mục lục:


CHƯƠNG
I: GIỚI THIỆU............................................................................................ 1


1.1.
Đặt vấn đề................................................................................................................ 1


1.2.
Mục tiêu và yêu cầu............................................................................................... 2


1.2.1.
Mục tiêu............................................................................................................. 2


1.2.2.
Yêu cầu ............................................................................................................. 2


1.3.
Giới hạn khóa luận ................................................................................................ 2


CHƯƠNG
II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU..................................................................... 3


2.1.
Giới thiệu về cây điều ........................................................................................... 3


2.1.1.
Nguồn gốc ........................................................................................................ 3


2.1.2.
Đặc điểm hình thái........................................................................................... 4


2.1.2.1.
Thân và cành............................................................................................... 4


2.1.2.2.
Rễ ................................................................................................................. 4


2.1.2.3.
Lá và tán lá ................................................................................................. 4


2.1.2.4.
Hoa............................................................................................................... 4


2.1.2.5.
Hạt và quả điều .......................................................................................... 6


2.1.3.
Đặc điểm sinh thái .......................................................................................... 6


2.1.3.1.
Điều kiện khí hậu ...................................................................................... 6


2.1.3.2.
Điều kiện đất đai ....................................................................................... 8


2.1.4.
Sự phân bố ........................................................................................................ 9


2.1.4.1.
Vùng trồng điều ưu tiên I ......................................................................... 9


2.1.4.2.
Vùng trồng điều ưu tiên II ........................................................................ 9


2.1.4.3.
Vùng trồng điều ưu tiên III ...................................................................... 9


2.1.5.
Đa dạng sinh học cây điều ............................................................................. 9


2.1.5.1.
Xét về hình dạng cây ................................................................................ 10


2.1.5.2.
Xét về màu sắc lá ...................................................................................... 10


2.1.5.3.
Xét về hoa .................................................................................................. 10


2.1.5.4.
Xét về trái ................................................................................................... 10


2.1.5.5.
Xét về hạt và năng suất hạt ...................................................................... 11


2.2.
Các phương pháp nghiên cứu tính đa dạng di truyền ....................................... 11


2.2.1.
Thông tin di truyền .......................................................................................... 11


2.2.2.
Phương pháp chiết tách DNA ........................................................................ 12


2.2.3.
Các marker phân tử dùng trong nghiên cứu đa dạng di truyền ................ 13


2.2.3.1.
RFLP............................................................................................................. 13


2.2.3.2.
PCR .............................................................................................................. 14


2.2.3.3.
SSCP ............................................................................................................ 16


2.2.3.4.
Microsatellite ............................................................................................. 17


2.2.3.5.
RAPD .......................................................................................................... 18


2.2.3.6.
AFLP ........................................................................................................... 19


2.3.
Các nghiên cứu trong và ngoài nước................................................................... 24


2.3.1.
Các nghiên cứu ngoài nước............................................................................. 24


2.3.2.
Các nghiên cứu trong nước............................................................................. 24


CHƯƠNG
III: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ........................ 25


3.1.
Thời gian và địa điểm ........................................................................................... 25


3.1.1.
Thời gian ........................................................................................................... 25


3.1.2.
Địa điểm ........................................................................................................... 25


3.2.Vật
liệu ..................................................................................................................... 25


3.2.1.
Các mẫu điều thí nghiệm ................................................................................ 25


3.2.2.
Hóa chất thí nghiệm ........................................................................................ 25


3.2.2.1.
Hóa chất dùng trong ly trích DNA........................................................... 25


3.2.2.2.
Hóa chất dùng trong kiểm tra định lượng DNA..................................... 26


3.2.2.3.
Hóa chất dùng để chạy RAPD ................................................................. 26


3.2.2.4.
Hóa chất dùng trong điện di và đọc kết quả .......................................... 26


3.2.2.5.
Hóa chất dùng để chạy AFLP .................................................................. 26



3.2.2.6.
Hóa chất dùng để đọc kết quả AFLP ...................................................... 26



3.2.3.
Trang thiết bị thí nghiệm ................................................................................ 26


3.3.
Phương pháp nghiên cứu ...................................................................................... 27


3.3.1.
Phương pháp ly trích DNA ............................................................................. 27


3.3.1.1.
Quy trình ly trích ....................................................................................... 27


3.3.1.2.
Định tính DNA bằng phương pháp điện di ............................................ 27


3.3.1.3.
Định lượng DNA bằng quang phổ kế ..................................................... 28


3.3.2.
Chạy RAPD ...................................................................................................... 29


3.3.2.1.
Primer .......................................................................................................... 29


3.3.2.2.
Bố trí thí nghiệm ........................................................................................ 29


3.3.3.
Chạy AFLP ....................................................................................................... 33


3.3.3.1.
Cắt thử DNA (300 ng) và chạy kiểm tra trên gel agarose 1,5% .......... 33


3.3.3.2.
Chuẩn bị hỗn hợp enzyme ....................................................................... 33


3.3.3.3.
Thực hiện phản ứng cắt và gắn ................................................................ 33


3.3.3.4. Nhân bản tiền chọn lọc ............................................................................ 34


3.3.3.5. Nhân bản chọn lọc .................................................................................... 34


3.3.4.
Phân tích kết quả bằng phần mềm NTSYS .................................................. 35


CHƯƠNG IV:
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ............................................................ 36


4.1.
Thu thập mẫu tại các vùng trồng điều thuộc tỉnh Ninh Thuận........................ 36


4.2.
Hoàn thiện quy trình ly trích DNA ...................................................................... 36


4.3.
Xác định quy trình RAPD – PCR và đánh giá mức độ đa dạng di truyền


của
quần thể điều hiện được trồng tại tỉnh Ninh Thuận.................................... 39


4.3.1. Thí nghiệm 1: Khảo sát quy trình RAPD – PCR


của Samal
và ctv (2003)............................................................................... 39


4.3.2. Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng của yếu tố chu kỳ đến phản
ứng


RAPD - PCR...................................................................................................... 40


4.3.3.
Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng của các yếu tố MgCl₂, dNTP


và
primer lên phản ứng RAPD – PCR......................................................... 40


4.3.4. Đánh giá mức độ đa
dạng di truyền của quần thể điều hiện được trồng


tại tỉnh Ninh Thuận với primer 11.............................................................. 41


4.3.5. Một vài điểm lưu ý khi thực hiện kỹ thuật RAPD......................................
51


4.4. Kết quả bước đầu của việc sử dụng kỹ thuật
AFLP trong nghiên cứu


tính đa hình của một số mẫu.................................................................................. 51


4.4.1. Kết quả phản ứng cắt và gắn.......................................................................... 52


4.4.2. Kết quả khuếch đại tiền chọn lọc.................................................................. 53


4.4.3. Kết quả khuếch đại chọn lọc......................................................................... 53


CHƯƠNG
V: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ.................................................................... 55


CHƯƠNG
VI: TÀI LIỆU THAM KHẢO................................................................... 56



Địa chỉ download tài liệu:http://www.mediafire.com/file/0ru3fnt8vwa4sf8/PHAM_VAN_BINH.rar